XJIPC OpenIR  > 资源化学研究室
人Ⅰ型胶原基因脂质体转染牛耳细胞克隆筛选方法
刘婷婷; 王亮; 吕自力; 彭涛; 王安江
2009
发表期刊西北农业学报
期号4页码:41198
摘要构建连接有人Ⅰ型胶原基因的质粒(PGC1-collagen),利用脂质体介导的方法转染荷斯坦奶牛耳成纤维细胞,优化一系列转染条件以提高转染效率,再利用G418和GFP荧光的表达来筛选稳定转染的细胞,最后以未转染的成纤维细胞作为阴性对照组,PGC1-collagen作为阳性对照组对转染的细胞进行PCR验证。结果显示:在6孔培养板中细胞融合度达到50%~60%左右介导1~3μg重组质粒转染24 h,转染效率可达25%~30%,筛选单克隆细胞在荧光显微镜观察检测到绿色荧光蛋白的表达。在使用800 U的G418筛选效果最好,维持浓度300~600 U,获得25个稳定表达的阳性细胞系,从中选取6个克隆进行PCR验证。成功利用脂质体转染方法将人Ⅰ型胶原基因成功转染到荷斯坦奶牛耳成纤维细胞,PCR验证结果正确。
关键词胶原基因 转染 成纤维细胞 阳性克隆
文献类型期刊论文
条目标识符http://ir.xjipc.cas.cn/handle/365002/1790
专题资源化学研究室
作者单位新疆金牛生物有限公司;中国科学院新疆理化技术研究所
推荐引用方式
GB/T 7714
刘婷婷,王亮,吕自力,等. 人Ⅰ型胶原基因脂质体转染牛耳细胞克隆筛选方法[J]. 西北农业学报,2009(4):41198.
APA 刘婷婷,王亮,吕自力,彭涛,&王安江.(2009).人Ⅰ型胶原基因脂质体转染牛耳细胞克隆筛选方法.西北农业学报(4),41198.
MLA 刘婷婷,et al."人Ⅰ型胶原基因脂质体转染牛耳细胞克隆筛选方法".西北农业学报 .4(2009):41198.
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