XJIPC OpenIR  > 资源化学研究室
牛卵丘细胞的生长特征与转基因
其他题名growth characteristics and transgenosis of bovine cumulus cells
吕自力; 王亮; 石国庆
2011
发表期刊中国实验动物学报
ISSN1005-4847
卷号19期号:4页码:306-311,377
摘要

目的了解牛卵丘细胞的生长特征及构建的基因载体对卵丘细胞的转染情况和转染后阳性细胞的扩增效率。方法用透明质酸酶消化牛卵丘/卵母细胞复合体(COCs)获得牛卵丘细胞,了解牛卵丘细胞的生长特点,并用分子大小分别为7178 bp和31 085 bp两种带有增强绿色荧光蛋白(EGFP)和新霉素抗性基因(Neor)的质粒载体pMSCV-EGFP-Neor和pGC1-collagen-EGFP-Neor分别转染靶细胞。结果用脂质体法转染对数生长期的细胞,均获得了绿色荧光阳性细胞,但小质粒的转染效率在72 h时是大质粒的6倍(14%vs.2.3%)。在800μg/mLG418筛选浓度下,14 d后分别获得了7个和3个较明显的单克隆细胞群,对它们进行挑选、扩大,都获得了较纯的单克隆细胞系。最后根据EGFP和collagen的已知基因序列对转染pGC1-collagen-EGFP-Neor质粒的阳性细胞进行三个不同区域DNA片段的扩增,结果表明,扩增的基因片段大小正确,数目完整。结论对卵丘细胞进行基因转染,分子大小等于或小于31 kb的基因可以有效转入,但小分子载体比大分子载体具有更高的转染效率。经过筛选都可以获得纯的转基因细胞系。

其他摘要

Objective To understand the growth characteristics of bovine cumulus cells and the transfection efficiency of cumulus cells,based on the gene vector pGC1-collagen-EGFP-Neor that containing human collagen type I cDNA gene and mammary gland specific promoter,constructed in our laboratory.Methods Bovine cumulus cells were obtained by digestion of bovine cumulus/oocyte complexes(COCs)using hyaluronidase.Gene vector pMSCV-EGFP-Neor and pGC1-collagen-EGFP-Neor was transfected into cumulus cells with cationic liposomes.The molecular size of pMSCV-EGFP-Neor and pGC1-collagen-EGFP-Neor are 7178 bp and 31085 bp,respectively,both of them contained enhanced green fluorescent protein gene(EGFP)and neomycin resistance gene(Neor).Results Transfection of the two plasmids generated green fluorescence positive cells.But the transfection efficiency of small molecular plasmids was 6 times(14% vs.2.3%)higher than the large molecular plasmid at 72 h of transfection.Screening used 800 mug/mL G418 at day 14,seven and three distinct positive monoclonal cell populations were obtained,respectively.The cells were selected and expanded,and pure positive cell lines were successfully obtained.Finally,the positive cell lines of transfection of pGC1-collagen-EGFP-Neor were identified by DNA amplification.The results showed that amplified gene fragments were of correct size and number.Conclusions The gene vector can be effectively transfected into cumulus cells using cationic liposomes,if molecular size of the gene is equal to or less than 31 kb.The small molecule vector has a higher transfection efficiency than the big one.However,after proper screening,both of them can be used to obtain pure transgenic positive cell lines

关键词 卵丘细胞 细胞培养 脂质体 细胞转染 转基因
学科领域Zoology ; Genetics & Heredity (Provided By Thomson Reuters)
收录类别CSCD
CSCD记录号CSCD:4286150
引用统计
文献类型期刊论文
条目标识符http://ir.xjipc.cas.cn/handle/365002/1564
专题资源化学研究室
作者单位石河子大学动物科技学院;乌鲁木齐市妇幼保健院;中国科学院新疆理化技术研究所;新疆农垦科学院畜牧兽医所
推荐引用方式
GB/T 7714
吕自力,王亮,石国庆. 牛卵丘细胞的生长特征与转基因[J]. 中国实验动物学报,2011,19(4):306-311,377.
APA 吕自力,王亮,&石国庆.(2011).牛卵丘细胞的生长特征与转基因.中国实验动物学报,19(4),306-311,377.
MLA 吕自力,et al."牛卵丘细胞的生长特征与转基因".中国实验动物学报 19.4(2011):306-311,377.
条目包含的文件
文件名称/大小 文献类型 版本类型 开放类型 使用许可
牛卵丘细胞的生长特征与转基因.pdf(2434KB)期刊论文作者接受稿开放获取CC BY-NC-SA浏览 请求全文
个性服务
推荐该条目
保存到收藏夹
查看访问统计
导出为Endnote文件
谷歌学术
谷歌学术中相似的文章
[吕自力]的文章
[王亮]的文章
[石国庆]的文章
百度学术
百度学术中相似的文章
[吕自力]的文章
[王亮]的文章
[石国庆]的文章
必应学术
必应学术中相似的文章
[吕自力]的文章
[王亮]的文章
[石国庆]的文章
相关权益政策
暂无数据
收藏/分享
文件名: 牛卵丘细胞的生长特征与转基因.pdf
格式: Adobe PDF
所有评论 (0)
暂无评论
 

除非特别说明,本系统中所有内容都受版权保护,并保留所有权利。